為先天性查加斯病開(kāi)發(fā)的尿檢
日前開(kāi)發(fā)成功的一種查加斯病尿液納米粒子檢驗(yàn)(Chunap)濃縮、保存和檢測(cè)尿液中的克氏錐蟲(chóng)抗原，以在早期無(wú)創(chuàng)診斷先天性查加斯病。
先天性查加斯病的傳統(tǒng)診斷方法基于出生時(shí)的顯微鏡檢和出生九個(gè)月后的血清檢驗(yàn)；然而，顯微鏡檢會(huì)漏檢許多感染，而且許多風(fēng)險(xiǎn)嬰兒出生后六到九個(gè)月時(shí)無(wú)法完成血清檢驗(yàn)。
以約翰霍普金斯大學(xué)(Baltimore, MD, USA)的科學(xué)家為首的多國(guó)科研小組收集了無(wú)先天感染的Bolivian嬰兒的74份尿樣和先天感染嬰兒的23份尿樣，后者的尿樣收集在抗錐蟲(chóng)治療前完成。收集了秘魯利馬12名血清陰性嬰兒的尿樣作為無(wú)病陰性對(duì)照。用顯微鏡微方法和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)評(píng)估嬰兒出生時(shí)和出生一個(gè)月后采集的血樣。
用兩種快速診斷檢驗(yàn)(RDT)檢測(cè)這些樣本，一種是間接血液凝集檢驗(yàn)(IHA)，另一種是InBios國(guó)際公司(Seattle, WA, USA)的Chagas Detect，它是一種免疫層析試紙測(cè)定?？蒲行〗M評(píng)估了聚N-異丙基丙烯酰胺納米粒子捕捉、濃縮和保存克氏錐蟲(chóng)抗原的能力，用臺(tái)盼藍(lán)賦予納米粒子功能，通過(guò)沉淀聚合方法合成納米粒子，并用光子相關(guān)譜法鑒定納米粒子。
然后用上述納米粒子濃縮先天感染和未感染嬰兒的尿樣。用抗克氏錐蟲(chóng)單克隆抗體脂磷(酸)聚糖通過(guò)蛋白質(zhì)印跡法洗脫和檢測(cè)抗原。用賽默飛世爾科技公司(Rockford, IL, USA)的加強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)Supersignal West Dura顯像抗原帶紋。由一名不知道患者查加斯病狀態(tài)的化驗(yàn)生物學(xué)家執(zhí)行Chunap檢驗(yàn)。
納米粒子將克氏錐蟲(chóng)抗原濃縮了100倍，蛋白質(zhì)印跡法的檢測(cè)限從50納克/毫升降至0.5納克/毫升。Chunap檢驗(yàn)作用于出生一個(gè)月后的一份樣本的靈敏度為91.3% (21/23)，與PCR作用于出生時(shí)和出生一個(gè)月后的兩份樣本的靈敏度相仿，而遠(yuǎn)高于顯微鏡檢查兩份樣本的靈敏度。Chunap檢驗(yàn)的特異性為96.5%，針對(duì)有病者為71/74，無(wú)病者為12/12。微方法和PCR的累積靈敏度分別為34.8% (8/23)和91.3% (21/23)。被粒子隔離的克氏錐蟲(chóng)抗原可使其不被胰蛋白酶消化。
該研究的論文發(fā)表于2014年10月2日的《公共科學(xué)圖書(shū)館》雜志《被忽視的熱帶病》分冊(cè)。作者總結(jié)說(shuō)，Chunap有望幫助邊遠(yuǎn)地區(qū)醫(yī)療機(jī)構(gòu)實(shí)現(xiàn)先天性查加斯病的早期床旁診斷。這項(xiàng)納米技術(shù)應(yīng)用于發(fā)展中國(guó)家還有很多工作要做?？蒲行〗M目前正在優(yōu)化一種基于納米粒子磁標(biāo)記的新分離方法，使得無(wú)需高速離心就能從尿液中分離粒子。雖然在這項(xiàng)研究中該方法用于查加斯病，但改造后也可用于檢測(cè)尿液和其它體液中的其它寄生蟲(chóng)感染。
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