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背景簡(jiǎn)介
　　前列腺癌是中老年男性的常見(jiàn)多發(fā)病，在男性所有類(lèi)型癌中占10%～20%, 是男性最常見(jiàn)的癌腫。測(cè)量血清中的前列腺特異抗原PSA可以用于篩選和早期診斷前列腺癌。它是公認(rèn)的診斷前列腺癌的較好的腫瘤標(biāo)志物，其診斷前列腺癌的特異性為82%-97%。前列腺特異抗原(prostate specific antigen , PSA) 是與前列腺癌相關(guān)的一種抗原，屬糖蛋白類(lèi)物質(zhì)。PSA和肛診是目前第一線(xiàn)家庭醫(yī)師或泌尿科醫(yī)師們篩檢早期前列腺癌的重要工具。 

試劑盒研制開(kāi)發(fā)流程和結(jié)果： 
　　1.PSA單克隆抗體的制備 
　　最終篩選得到5株雜交瘤細(xì)胞株，分別測(cè)定其亞型，并通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)ELISA實(shí)驗(yàn)進(jìn)行表位分析。其中3株在之后的抗體配對(duì)實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證配對(duì)，其效價(jià)見(jiàn)下表。

　　*The supernatant was from the culture of 1×106 hybridoma cells in 9 ml medium for 3 days.

　　2.建立ELISA檢測(cè)試劑盒體系 
　?。?）抗體配對(duì)分析 
　　將獲得的5株單克隆抗體分別進(jìn)行純化和標(biāo)記，進(jìn)行兩輛交叉配對(duì)試驗(yàn)，最終篩選到兩組配對(duì)可用于雙抗體夾心法的ELISA試劑盒：S-44-10 (A) — S-191-5 (D)- HRP，S-102-11(B) — S-191-5(D)- HRP。 分別用于檢測(cè)總PSA （tPSA）和 游離PSA ( fPSA)。 
　　如下圖所示（A：S-44-10抗體 B：S-102-11抗體 D：S-191-5抗體） 

　?。?）兩種試劑盒的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立（雙單抗夾心法） 
　　經(jīng)摸索優(yōu)化試劑盒中各種成分，最終選定了相應(yīng)的原料使用濃度、試劑配方和反應(yīng)條件。如圖所示：此兩種試劑盒檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品均具有很好的線(xiàn)性關(guān)系。 

　　(3) 試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品 
　　標(biāo)定是測(cè)定的基礎(chǔ)，利用 NIBSC國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)fPSA和tPSA試劑盒進(jìn)行標(biāo)定。 
　　NIBSC國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品：

• a. Prostate Specific Antigen (90:10) 96/670 (WHO International Standard or Reference Reagent);
• b. Prostate Specific Antigen (free) 96/668 (WHO International Standard or Reference Reagent);
  

  本公司利用基因工程技術(shù)，在昆蟲(chóng)真核系統(tǒng)中通過(guò)昆蟲(chóng)細(xì)胞桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)并純化了重組的PSA，重組PSA用NIBSC標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定后，可以作為兩種試劑盒中的參照品使用。重組PSA作為試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的鑒定，如下圖所示。 

　　(4)小樣本臨床實(shí)驗(yàn) 
　　將自行研制的試劑盒測(cè)定PSA臨床樣本（27份陽(yáng)性+30份陰性）, 以瑞典CanAg公司的試劑盒作為比較參照。

線(xiàn)形范圍0.5-50ng/ml，靈敏度0.5ng/ml

對(duì)于已知標(biāo)準(zhǔn)品濃度其測(cè)定的準(zhǔn)確度為94.05%

與其他 疾病病人血清無(wú)交叉反應(yīng)，特異性為100%

取得成果 
　　已研發(fā)出分別針對(duì)血清中游離PSA（f-PSA）以及總PSA（t-PSA）的檢測(cè)試劑盒，首次建立了“一步法”快速反應(yīng)操作體系與流程，將整個(gè)操作過(guò)程時(shí)間縮短到了一小時(shí)以?xún)?nèi)。建立和優(yōu)化了夾心ELISA法檢測(cè)體系，包括試劑盒各組分的確定，各組分配方、使用條件及參數(shù)的優(yōu)化，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立以及診斷標(biāo)準(zhǔn)的確定等。用NIBSC國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)f-PSA及t-PSA兩種檢測(cè)試劑盒進(jìn)行了標(biāo)定，并通過(guò)基因工程手段自制了重組PSA蛋白，用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定后，可用于兩種試劑盒參照品。 
　　F-PSA試劑盒靈敏度為0.46ng/ml，準(zhǔn)確度為94.1%，特異性為100%，批內(nèi)變異度為8%；T-PSA試劑盒靈敏度為0.50ng/ml，準(zhǔn)確度為94.1%，特異性為100%，批內(nèi)變異度為8%。 
　　小樣本臨床試驗(yàn)證實(shí)本試劑盒與 Canag產(chǎn)品性能相似，57例樣本檢測(cè)的診斷結(jié)果對(duì)比顯示靈敏度 = 24 / 25 x 100% = 96.0% ,特異度 = 32 / 32 x 100% = 100% ,準(zhǔn)確率= ( 24 + 32 )/ 57 x 100% = 98.2%。