登革熱IgM抗體檢測(cè)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)
1. 目的
根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)ws216-2008，規(guī)范本中心登革熱IgM抗體的檢測(cè)。
2. 適用范圍
2.1 適用于血清或血漿中登革熱IgM抗體的檢測(cè)。
3. 職責(zé)
檢測(cè)人員：負(fù)責(zé)按照本檢測(cè)細(xì)則對(duì)被測(cè)樣品進(jìn)行檢測(cè)。
復(fù)核人員：負(fù)責(zé)對(duì)檢測(cè)操作是否規(guī)范以及檢測(cè)結(jié)果是否準(zhǔn)確進(jìn)行復(fù)核。
科室負(fù)責(zé)人：負(fù)責(zé)對(duì)檢測(cè)操作的監(jiān)督和檢測(cè)結(jié)果的審核。
4. 規(guī)程：親和素-生物素法檢測(cè)登革熱IgM抗體。
4.1 原理：在微孔條上包被生物素化抗原，配以酶標(biāo)記抗人IgM單克隆抗體作為標(biāo)記抗原及TMB顯色劑等其它試劑，采用親和素-生物素法檢測(cè)登革熱IgM抗體。
4.2 試劑
4.2.1 生物素化抗原預(yù)包被板
4.2.2 陰性、陽(yáng)性對(duì)照
4.2.3 酶結(jié)合物
4.2.4 30X濃縮洗滌液。（用蒸餾水1：30稀釋使用）
4.2.5 顯色劑A、B液。
4.2.6 終止液。
4.2.7 封片。
4.3 儀器與設(shè)備
4.3.1 20-200μL可調(diào)移液器。
4.3.2 電熱恒溫水溫箱。
4.3.3 微量振蕩器。
4.3.4 洗板機(jī)、酶標(biāo)儀。
4.4 操作步驟
參照試劑盒說(shuō)明書(shū)或按以下步驟操作。
4.4.1 將試劑盒平衡至室溫后取出反應(yīng)板拆封。
4.4.2 加樣：將待檢標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：41稀釋（5ul-200ul）,于反應(yīng)板中加稀釋好的待檢標(biāo)本及陰陽(yáng)對(duì)照各100ul/孔，設(shè)空白對(duì)照一孔（不加任何液體），輕輕混勻。37℃溫育30分鐘。
4.4.3 甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗板3次并拍干。
4.4.4 加酶結(jié)合物：每孔2滴，混勻后置37℃溫育30分鐘。
4.4.5 同4.4.3步驟。
4.4.6 顯色：每孔加顯色劑A、B各一滴，用震蕩器混勻，后置37℃溫育10分鐘
4.4.7 用酶標(biāo)儀讀數(shù)，取波長(zhǎng)450nm，先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。
4.4.8 結(jié)果判斷
4.4.8.1 P/N=標(biāo)本OD值/陰性對(duì)照OD值
4.4.8.2 P/N≥2.1為陽(yáng)性；
4.4.8.3 1.5≤P/N<2.1 為可疑標(biāo)本；P/N<1.5為陰性。
4.4.8.4 陰性對(duì)照（NC）小于0.10時(shí)以0.10計(jì)，大于0.1小于0.21時(shí)以實(shí)際OD值計(jì)算；若大于0.21時(shí)，實(shí)驗(yàn)可能出現(xiàn)了較大誤差，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
4.4.8.5 陽(yáng)性對(duì)照（PC）值≥0.4，實(shí)驗(yàn)成立，否則需重做。
4.6 注意事項(xiàng)
4.6.1 從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測(cè)標(biāo)本所需微孔反應(yīng)條應(yīng)置37℃平衡30分鐘后方可使用，余者應(yīng)及時(shí)封存于冰箱中以備后用。在平衡試劑的同時(shí)，待測(cè)標(biāo)本需置室溫平衡30分鐘后再行測(cè)試。
4.6.2 使用前試劑應(yīng)搖勻，并棄去1～2滴后垂直滴加。
4.6.3 封片不能重復(fù)使用。
4.6.4 結(jié)果判斷須在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成。
4.6.5 不同批號(hào)的試劑不可混用。
4.6.6 待測(cè)標(biāo)本不可用NaN3防腐，如需稀釋標(biāo)本，請(qǐng)用小牛血清稀釋。
4.6.7 洗滌時(shí)每孔均須加滿，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。
4.6.8 避免用溶血、混濁或脂血標(biāo)本。
廣州健侖生物科技有限公司
2005/05/06
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