miRNeasy Serum/Plasma Kit (50)

簡介：

用于從動物及人體血漿和血清中純化包括miRNA的無細(xì)胞總RNA

1. 內(nèi)參用于標(biāo)準(zhǔn)化

2. 洗脫體積最小化

3. 高純度RNA，適合多種下游應(yīng)用

4. 簡單、靈敏的操作流程

5. 自動化實(shí)驗(yàn)方案

miRNeasy Serum/Plasma Kit包括檢測miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control的miScript Primer Assay，提供一個方便的系統(tǒng)用于標(biāo)準(zhǔn)化。miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control（需單獨(dú)訂購）是C. elegans miR-39 miRNA的類似物，以每管10 pmol凍干粉形式提供。

詳細(xì)信息：

性能

miRNeasy Serum/Plasma Kit可從至多200 μl血清或血漿中有效純化RNA。miRNeasy Kits制備的RNA純度高，可直接用于敏感的下游應(yīng)用。miRNeasy操作流程將鹽或苯酚污染的可能性降到最低，這些污染可能影響后續(xù)分析。

原理

目前miRNA研究中最令人興奮的領(lǐng)域之一就是對血清或血漿樣本中存在的miRNA進(jìn)行檢測。在血清和血漿中存在的相對穩(wěn)定的胞外miRNA引起了極大興趣，因?yàn)閙iRNA水平變化可作為潛在的多種疾病的無創(chuàng)性生物標(biāo)志物。通過從血清或血漿純化RNA，發(fā)現(xiàn)某些癌癥出現(xiàn)幾種miRNAs的獨(dú)特表達(dá)。miRNeasy Serum/Plasma Kit可從小體積血漿或血清中純化RNA。血清和血漿中的RNA通常由小于100個核苷酸的分子組成。純化的RNA可使用miScript PCR System進(jìn)行生物標(biāo)志物研究。

miRNeasy Serum/Plasma Kit整合了基于苯酚/胍的樣本裂解方法和基于硅膠膜的總RNA純化方法。試劑盒中包括的QIAzol Lysis Reagent是苯酚和異硫氰酸胍的單相溶液，便于裂解組織，抑制RNases，并去除大部分有機(jī)抽提裂解液中的胞內(nèi)DNA和蛋白。

標(biāo)準(zhǔn)化內(nèi)參的使用

在血清或血漿樣本中miRNA表達(dá)譜使用什么作為內(nèi)參，目前在研究學(xué)者間還沒有明確共識。很多研究者選擇將合成的miRNA導(dǎo)入RNA樣品中，以幫助監(jiān)測RNA回收率和反轉(zhuǎn)效率。QIAGEN推薦miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control作為血清或血漿miRNA表達(dá)譜的內(nèi)參。miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control是C. elegans miR-39 miRNA類似物，使用miScript PCR System配合Ce_miR-39_1 miScript Primer Assay（miRNeasy Serum/Plasma Kit中提供）通過RT-PCR可輕松檢測。miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control需單獨(dú)訂購。試劑盒中提供的Ce_miR-39_1 miScript Primer Assay需與miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control配合使用。獲取更多細(xì)節(jié)，可參考miRNeasy Serum/Plasma Handbook。

操作流程

血清和血漿樣本溶于QIAzol Lysis Reagent中。加入氯仿后，裂解液離心后分成水相和有機(jī)相。RNA位于上層水相，DNA位于中間相，蛋白位于下層有機(jī)相或中間相。

提取上層水相后，加入乙醇以提供RNA結(jié)合的合適條件，RNA分子大于18個核苷酸。樣品再加入RNeasy MinElute離心柱，總RNA結(jié)合到膜上，苯酚和其他污染物被有效洗去。高品質(zhì)RNA在小體積不含RNase水中洗脫。

血清和血漿中主要含有小RNAs，因此無需分開純化小RNA和大RNA組分。

使用miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化

使用miRNeasy Serum/Plasma Kit純化miRNA時，加入QIAzol Lysis Reagent后，在加入氯仿分相前，向樣本中加入miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control。real-time RT-PCR后，合成miRNA的C_T值可對樣本進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，可作為不同RNA純化產(chǎn)量和擴(kuò)增效率的對照。此外，通過與合成miRNA的標(biāo)準(zhǔn)曲線C_T值比較，可評估RNA的回收，因?yàn)楹铣蒻iRNA與RNA純化流程無關(guān)。

在QIAcube全自動核酸純化儀上進(jìn)行miRNA自動純化 

在QIAcube全自動核酸純化儀上可完全自動純化包括miRNA的總RNA。新型QIAcube全自動核酸純化儀采用先進(jìn)技術(shù)處理QIAGEN離心柱，將自動化、低通量樣品制備無縫整合到實(shí)驗(yàn)室工作流程中。使用QIAcube全自動核酸純化儀的樣品制備流程與手工操作相同（如裂解、結(jié)合、洗滌和洗脫），可使用miRNeasy Serum/Plasma Kit進(jìn)一步純化高品質(zhì)RNA。

應(yīng)用

miRNeasy Serum/Plasma Kit可純化包括miRNA的總RNA，用于多種應(yīng)用，包括：

生物標(biāo)志物研究

Northern印跡分析

使用miScript PCR System進(jìn)行定量real-time RT-PCR

微陣列分析